Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Органические растворители. Для улучшения МЭКХ-разделения гидрофобных соединений к раствору электролита могут быть добавлены органические модификаторы (метанол, пропанол, ацетонитрил и другие). Добавление этих модификаторов обычно уменьшает время миграции и селективность разделения. Поскольку добавление органических модификаторов влияет на величину критической концентрации мицеллообразования, определённая концентрация поверхностно-активного вещества может быть использована только в пределах некоторого процентного содержания органического модификатора до прекращения мицеллообразования или отрицательного влияния на этот процесс, приводящего к исчезновению мицелл и прекращению разделения. Диссоциация мицелл в присутствии большого количества органического растворителя не всегда означает невозможность дальнейшего разделения; в некоторых случаях гидрофобное взаимодействие между мономером ионного поверхностно-активного вещества и нейтральным разделяемым веществом приводит к образованию сольвофобных комплексов, которые могут быть разделены электрофоретически.
Добавки для хиральных разделений. Для разделения энантиомеров с использованием МЭКХ хиральный селектор включается в мицеллярную систему либо ковалентно связывается с поверхностно-активным веществом, либо добавляется к раствору электролита, в которм происходит разделение мицелл. Мицеллы, способные к хиральным разделениям, обычно включают в себя соли N-додеканоил-Ь-аминокислот, соли желчных кислот и т.д. Хиральное разделение может быть также проведено с помощью циклодекстринов, добавленных к растворам электролитов, содержащих мицеллы ахиральных поверхностноактивных веществ.
Другие добавки. Существует ряд подходов, предполагающих добавление различных реагентов к буферному раствору для изменения селективности. Добавление некоторых типов циклодекстринов к буферному раствору также может быть использовано для уменьшения взаимодействия гидрофобных веществ с мицеллой, тем самым увеличивая селективность разделения для такого типа соединений.
Добавление веществ, которые способны изменять взаимодействия между разделяемым веществом и мицеллой вследствие адсорбции на последней, используется для улучшения селективности разделения в МЭКХ. Данные добавки могут представлять собой второе поверхностно-активное вещество (ионное или неионное), которое увеличивает количество смешанных мицелл или катионов металлов, которые растворяются в мицелле и образуют координационные комплексы с разделяемыми веществами.
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Пики должны быть разделены соответствующими временами миграции, чтобы в итоге получить исправленную площадь, позволяющую:
- компенсировать смещения времен удерживания от анализа к анализу, тем самым уменьшить различия в величине отклика,
-компенсировать различные отклики компонентов пробы с различными временами миграции.
При использовании внутреннего стандарта следует убедиться в том, что пик исследуемого вещества не скрыт аналогичным пиком внутренного стандарта.
РАСЧЁТЫ
По полученным данным рассчитывают содержание исследуемого компонента или компонентов. Если требуется, рассчитывают процентное содержание одного или нескольких компонентов образца путём определения исправленной площади пика или пиков, как процентной части исправленных площадей всех пиков, исключая пики, соответствующие растворителям или любым добавленным реагентам (метод нормализации). Рекомендуется использование автоматической системы интеграции (интегратора или системы получения и обработки данных)
ПРИГОДНОСТЬ СИСТЕМЫ
Параметры пригодности системы используются для проверки поведения системы капиллярного электрофореза. Выбор этих параметров зависит от используемой разновидности капиллярного электрофореза. К ним относятся: фактор удерживания (к) (только для мицеллярной электрокинетической
хроматографии), число теоретических тарелок (N), фактор симметрии (As) и разрешение (Rs). В предыдущих разделах были описаны уравнения для расчётов N и Rs, ниже приведены уравнения, позволяющие рассчитать эти параметры из электрофореграмм.
ЧИСЛО ТЕОРЕТИЧЕСКИХ ТАРЕЛОК
Число теоретических тарелок (N) может быть рассчитано с помощью выражения:
N = 5,54
Wh
где:
tR - время миграции или расстояние по базовой линии от точки ввода пробы до перпендикуляра, опущенного из максимума пика, соответствующего компоненту,
wh - ширина пика на половине высоты.
2
РАЗРЕШЕНИЕ
Разрешение (Rs) близких по высоте пиков двух компонентов может быть рассчитано из выражения:
R = и8(^2 - Ч)
Rs
Wh1 + wh2
tR2 > tR1 5
где:
tRi и tR2 - времена миграции или расстояния по базовой линии от точки ввода пробы до перпендикуляров, опущенных из максимумов двух соседних пиков,
